维真回答：腺相关病毒（AAV）属于微小病毒科，是一类小的、二十面体、无包膜病毒。需要辅助病毒如腺病毒或疱疹病毒参与复制。AAV不编码自己的聚合酶，因此其复制过程依赖于宿主细胞的聚合酶活性。 AAV是一种复制缺陷病毒，复制依赖于其他辅助病毒，如腺病毒和疱疹病毒。

维真回答：重组AAV（rAAV）是人工改造的AAV，没有编码AAV病毒复制和结构蛋白的rep和cap基因。
rAAV中与复制和包装相关的rep和cap 基因被替换为ITRs间的基因或结构，这使rAAV具有4.1-4.9 kb的包装容量。

维真回答：可在生物安全1级（BSL-1）实验室操作生产无辅助病毒和编码非致癌基因的重组AAV。另外，应在生物安全2级（BSL-2）实验室封闭处理具有生物危害性的材料。

维真回答：迄今为止，未发现野生型AAV有致病性。野生型AAV，在无需辅助病毒（如腺病毒）的存在下，复制效率非常低。重组腺相关病毒（rAAV）由多个质粒（cis质粒、辅助质粒、rep/Cap质粒）组成。Cis质粒、辅助质粒与rep/Cap质粒之间不具有同源性序列，因此重组AAV在理论上不具有复制的能力。

维真回答：AAV具有~4.7Kb的包装能力。2个ITR之间插入的DNA长度接近允许的较大值4.7Kb时，包装效率显著降低。例如，对于过表达来自cDNA的基因，CMV-poly（A）信号元件约为1KB，因此较大可包装的cDNA长度约为3.2kb，如果共表达GFP（约0.8kb），则可包装的容量大约为2.4kb。

维真回答：目前为您提供的 AAV 血清型为 AAV1，AAV2，AAV5，AAV7，AAV6，AAV8 &  AAV9。请参阅下面指南中参考文献的建议。

同时参阅转染效率与不同细胞类型对照表，以确定哪种血清型AAV更适合您的细胞。

维真回答：rAAV病毒滴度很高，可感染分裂和非分裂细胞、免疫原性极小、体内表达外源基因时间长。 

维真回答： 纯化的AAV载体在4℃或更低温度下高度稳定。建议您将AAV分装后，-80℃下长期保存。

维真回答：您可以从我们的人源全长cDNA库(18,000预制ORF)中挑选，或者提供您的质粒DNA或DNA序列，我们将基因克隆至AAV载体。您还可以指定特定的融合标签和AAV血清型。
基因沉默服务，请您提供确切的shRNA的序列以构建重组rAAV载体。我们的标准载体具有U6启动子和GFP标记。
通常情况下，可为客户提供500 ul病毒液 1×10^12-13 VP /ml。也可根据客户的需要，提供特定体积和滴度的产品。

 

维真回答：（1）腺病毒和慢病毒均有各自的优缺点（见下表），应根据试验目的选择相应的病毒类型。（2）不同病毒在不同细胞中的感染效率存在差异，为帮助您选择感染效果较佳的病毒或血清型病毒，我们公司新研发出了“GFP-病毒检测试剂盒”，可迅速、准确地帮助您寻找到适合您细胞的病毒载体。

	腺病毒	腺相关病毒	慢病毒
基因组	dsDNA	ssDNA	ssRNA(+)
囊膜	无	无	有
基因组大小	38-39kb	5kb	9kb
感染类型	分裂和非分裂细胞	分裂和非分裂细胞	分裂和非分裂细胞
与宿主基因组相互作用	非整合	非整合	整合
外源基因表达时间	瞬时	潜在长效	长效
包装容量	7.5kb	4.5kb	6kb
免疫原性	高	非常低	低
病毒滴度	10E10pfu/ml	10E13vg/ml	10E
转染效率	100%	70%	70%
外源基因表达量	高	中	中

 维真回答：ViGene生物的腺病毒载体是复制缺陷型的人类血清5型腺病毒，E1和E3基因缺失。ViGene生物的慢病毒载体是第三代的慢病毒载体， 将3’LTR的增强子功能进行了缺失，形成了所谓的“自灭活”，即该病毒基因组整合到细胞基因组后，不会产生新的子代病毒；5’LTR的U3区替换成了CMV，是较安全的慢病毒载体。病毒实验应在BL2生物安全二级实验室操作，操作时应始终佩戴手套。

1.什么是Adeno-associated virus (AAV) &重组 AAV(rAAV) & helper free rAAV?

腺相关病毒（AAV）属于微小病毒科，是一类小的、二十面体、无包膜病毒。AAV是一种复制缺陷病毒，复制依赖于其他辅助病毒，如腺病毒和疱疹病毒。AAV不编码自己的聚合酶，因此其复制过程依赖于宿主细胞的聚合酶活性。

重组AAV（rAAV）是人工改造的AAV，没有编码AAV病毒复制和结构蛋白的rep和cap基因。rAAV中与复制和包装相关的rep和cap 基因被替换为ITRs间的基因或结构，这使rAAV具有4.1-4.9 kb的包装容量。

2.使用AAV有哪些生物安全性要求?

可在生物安全1级（BSL-1）实验室操作生产无辅助病毒和编码非致癌基因的重组AAV。另外，应在生物安全2级（BSL-2）实验室封闭处理具有生物危害性的材料。

3.重组AAV 安全吗?

迄今为止，未发现野生型AAV有致病性。野生型AAV，在无需辅助病毒（如腺病毒）的存在下，复制效率非常低。重组腺相关病毒（rAAV）由多个质粒（cis质粒、辅助质粒、rep/Cap质粒）组成。Cis质粒、辅助质粒与rep/Cap质粒之间不具有同源性序列，因此重组AAV在理论上不具有复制的能力。

4.重组AAVs的克隆容量有多大?

AAV具有〜4.7Kb的包装能力。2个ITR之间插入的DNA长度接近允许的较大值4.7Kb时，包装效率显著降低。例如，对于过表达来自cDNA的基因，CMV-poly（A）信号元件约为1KB，可包装的cDNA长度约为3.2kb，如果共表达GFP（约0.8kb），则可包装的容量大约为2.4kb。

5.哪些血清型的 AAV 可供选择？我该选用哪种AAV呢?

目前为您提供的AAV 血清型为AAV1，AAV2，AAV5，AAV7，AAV6，AAV8 &  AAV9。请参阅下面指南中参考文献的建议。

                                                        

 

AAV Serotype	Muscle	Hepatocyte	Pulmonary	Brain	Retinal pigmented epithelium	Pancreas	Kidney
AAV1	X			neuons and glial cells	X	X
AAV2							X
AAV5			lung alveolar cells	neuons and glial cells	X
AAV6	X		X
AAV7	X			neurons	X
AAV8	X	X		neurons	X	X
AAV9	X	X	X		X	X	X

 

请同时参阅转染效率与不同细胞类型对照表，以确定哪种血清型AAV更适合您的细胞。

6.使用重组腺相关病毒rAAV传递基因的优势是什么?

rAAV病毒滴度很高，可感染分裂和非分裂细胞、免疫原性极小、体内表达外源基因时间长。

7.AAV 载体稳定吗? 如何保存AAV载体?  

纯化的AAV载体在4℃或更低温度下高度稳定。建议您将AAV分装后，-80℃下长期保存。

8.订制AAV服务，客户需要提供哪些材料? &客户收到的产品是怎样的?

您可以从我们的人源全长cDNA库(17,000预制ORF)中挑选，或者提供您的质粒DNA或DNA序列，我们将基因克隆至AAV载体。您还可以指定特定的融合标签和AAV血清型。

基因沉默服务，请您提供确切的shRNA的序列以构建重组rAAV载体。我们的标准载体具有U6启动子和GFP标记。

通常情况下，可为客户提供500 ul病毒液1×10^12 V.G. /ml。也可根据客户的需要，提供特定体积和滴度的产品。