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AAV使用情况实例分析
发布日期:2016-06-23 浏览次数 :

1.AAV感染不同种类的细胞

 

               

HEK293T

 

 

 AAV虽然也可体外感染一些细胞,但感染效率比较低。具体感染效率可以参考本手册的常见问题解答中的附表。


2.AAV感染神经干细胞

 

            GFP                   NESTIN                     MERGE

  

Sorted cells were expanded for an additional26 days (total 40 days after AAV infection), and ~94.5% of cells maintained GFP and nestin expression

 

Jang J H, Koerber J T, Kim J S, et al. An evolved adeno-associated viral variant enhances gene delivery and gene targeting in neural stem cells[J]. Molecular Therapy, 2011, 19(4): 667-675.

 

由于AAV的低免疫原性,即便感染干细胞,也不会引起细胞的分化。

 

3. 各种类型的重组AAV注射入不同神经发育阶段的小鼠脑内产生不同分布

 

Chakrabarty P, Rosario A, Cruz P, et al. Capsid serotype and timingof injection determines AAV transduction in the neonatal mice brain[J]. PloS one, 2013, 8(6): e67680.

注射方法:脑室注射

注射剂量:2×1010  v.p

 


4.不同血清型的AAV感染心脏心肌细胞

由于组织特异性,即便提高病毒的注射量,对于低表达的血清型,其所携带基因的表达水平没有太大的改善。由图可知,AAV9型对心肌细胞的感染效率极高,AAV8次之。

 

5. 重组AAV1-SERCA2a转导入猪冠状动脉的表达

 

Hadri L, Bobe R, Molecular Therapy, 2010, 18(7): 1284-1292.

注射方法:冠状动脉注射   

注射剂量:1012v.p


6. AAV1特异性感染中枢神经系统以及不同类型AAV感染中枢神经系统的效果


Edmund R Hollis II, Ken Kadoya, Matthew Hirsch, Richard J Samulskiand Mark H Tuszynski, Molecular Therapy , vol16 ,no. 2, feb, 2008.

注射方法:神经肌肉注射

注射剂量:2.1x10E8 v.p

分别用AAV1-6感染中枢神经系统,AAV1的效果最好,感染运动神经元的数目最多。

 

7.不同血清型AAV 体外注射大鼠5天后在脑的海马回中的表达

 

Ronald L. Klein, Robert D. Dayton, Nancy J. Leidenheimer, Karen Jansen, Todd E. Golde, and Richard M. Zweig. MOLECULAR THERAPY, 2006, 3 , 13(3).


8.AAV2在研究小鼠脉络膜新生血管形成中作为基因导入的载体

 

 Therapeutic effect of CBAPEDF-AAV2 on choroidal neovascularization development and antibody responses to AAV2 capsid following single and sequential intravitreal injections. A-D:Representative CNV images from mouse eyes that were untreated (A), received a single intravitreal (IV) treatment (B), received first IV treatment (C), and received a second IV treatment (D) of AAV2-PEDF.

 

Qiuhong Li, Rehae Miller, Ping-Yang Han, Jijing Pang, Astra Dinculescu, Vince Chiodo, William W. Hauswirth.  Molecular Vision, 2008, 14:1760-1769.

注射方法:玻璃体腔内注射

注射剂量:4x10E10  V.G.

 

9.AAV7,8感染视锥形细胞

 

 

 

注射方法:在接近晶状体的虹膜上切开一个小口后,缓慢(20-30秒内)注射。至少在3个星期后进行后续的实验。

注射剂量:2ul。


10. scAAV9 介导的CB-GFP标记静脉注射入大鼠3周后在脑的星形胶质和神经元中表


a:纹状体; b:海马回;c:齿状回;d :小脑浦肯野细胞; e:海马回的椎体细胞f:齿状回的颗粒细胞;a-d 新生鼠 e-f成年鼠(f)200 mm (e); 100 mm (f),50 mm (a–d)

Foust K D, et al. Intravascular AAV9 preferentially targets  neonatal neurons and adult astrocytes[J]. Nature biotechnology, 2009, 27(1): 59-65.

注射方法:尾静脉注射

注射剂量:4 × 1011v.p

 

11.AAV8感染肝脏肝细胞

 

注射方法:尾部静脉注射

注射体积:200ul、1012v.p


12. AAV9 介导的标记注射成年小鼠7周后在脊髓和大脑的表达

a-d:颈椎,e-h:腰椎,i-l:星形胶质细胞,m-p:脑

Foust K D, et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult

 astrocytes[J]. Nature biotechnology, 2009, 27(1): 59-65.

注射方法:尾静脉注射  

注射剂量:4 × 1012 v.p

 

13. AdVLacZ, AAV2LacZ, 和 AAV8LacZ 介导的标记在C57Bl/6鼠的胰腺中的表达

AdVLacZ                   AAV2LacZ             AAV8LacZ

 

胰腺胰岛细胞

 

Wang A Y, et al. Comparison of adenoviral and adeno-associated viral vectors for pancreatic gene delivery in vivo[J]. Human gene therapy, 2004, 15(4): 405-413.

注射方式:胰腺注射

注射剂量: AdVLacZ-108pfu;AAV2,8LacZ-1011v.p

AAV比腺病毒的持续表达时间要长很多,通常AAV可在体内表达数周甚至数月,但是腺病毒仅能表达几天。

 

14. AAV-1-6,8 和慢病毒介导的GFP在大鼠的脊髓中的表达

 

 

Blits B, Derks S, Twisk J, et al.Journal of neuroscience methods, 2010, 185(2):257-263.

注射方法:脊髓注射

注射剂量:注射5×108 v.p不同外壳的AAV 病毒

由图显示,AAV介导的在大鼠脊髓中的基因表达要比慢病毒介导的表达更高。AAV比慢病毒更容易转染脊髓。



























        

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