1. 质粒扩增

　　构建好的AAV载体、包装质粒和辅助质粒需经过大量抽提， 浓度大于1ug/ul， A260/280 在1.7-1.8 间方可用以包毒。

　　2. 传AAV-293细胞

　　将培养AAV-293 细胞T75 瓶中的培养基吸净，加入2mL 4 度冰箱取出的0.25%胰 酶，使其均匀覆盖瓶底，置于37 度培养箱中3-5min，取出，摇晃可发现细胞于底部脱 离，将其全部晃下，加入3mL 37 度水浴中预热的10% DMEM，移液枪用10mL 移液 管进行吹打，较大力吹打6-8 次即可，不留死角，瓶口处较难吹打可将移液管对准培 口，小力将培养基打出即可覆盖到接近瓶口的细胞。

　　之后，将所有细胞吸出，置于 15mL 离心管中，取50ul 混匀后的细胞于1.5mL eppendorf 管中，加入450ul 10% DMEM，即为10 倍稀释，混匀，取10ul 细胞于计数板中计数。计数板上共4 大格，每 大格16 小格。计数时，4 大格均计数，总数除以4(得每大格细胞数)，再乘以10(10 倍稀释)，即为实际n 万/mL 细胞浓度。传代当天记为第一天，若第二天进行转染，铺900-1000 万/T75;若第三天转染，铺350-400 万/T75。每瓶T75 加10mL 10% DMEM 培养基。转染当天观察细胞密度，80-90%满即可进行转染。转染前无需换培养基。

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