AAV 病毒浓缩：

　　1) 10,000 g 离心去除细胞碎片，将离心上清转移到一个新离心管中。

　　2) 将两次收集的上清混合在一起，用 0.45um 滤器过滤除杂质

　　3) 加入 1/2 体积的 1M NaCl，10% PEG8000 溶液，混合均匀，4度过夜

　　4) 12,000 rpm 离心 2h，弃上清，病毒沉淀用适量的 PBS 溶液溶解，待完全溶解 后 用 0.22um 滤器过滤除菌。

　　5) 加入 Benzonase 核酸酶消化去除残留的质粒DNA(终浓度为50 U/ml)。合上管盖，颠倒几次以充分混合。在37 °C 孵育30 分钟;

　　6) 用 0.45 μm 过滤头过滤，取滤出液，即为浓缩的AAV病毒。

　　AAV的纯化

　　1) 向病毒浓缩液中添加固体 CsCl 直到密度为1.41 g/ml(折射率为1.372);

　　2) 将样品加入到超速离心管中，用预先配好的 1.41 g/ml CsCl 溶液将离心管剩余空间填满;

　　3) 在 175,000 g 下离心24 小时，以形成密度梯度。按顺序分步收集不同密度的 样品，取样进行滴度测定。收集富集有AAV 颗粒的组分;

　　4) 重复上述过程一次。

　　5)将病毒装入100 kDa的透析袋，4度透析脱盐过夜。此即为纯化的AAV病毒

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