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慢病毒载体的构建原理,慢病毒包装
发布日期:2017-04-28 浏览次数 :

  慢病毒属于逆转录病毒科,但其基因组结构复杂,除 gag、pol 和 env 这 3 个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外,还包括 4 个辅助基因,vif、vpr、nef、vpu 和 2 个调节基因 tat 和 rev 。 HIV 21 是慢病毒中最具特征性的病毒,第一个慢病毒载体系统即以此病毒为基础进行构建的。

  慢病毒载体的构建原理就是将 HIV 21 基因组中的顺式作用元件 ( 如包装信号、长末端重复序列 ) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。

  载体系统包括包装成分和载体成分:包装成分由 HIV 21 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白;

  载体成分与包装成分互补,含有包装、逆转录和整合所需的 HIV 21顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。

  为降低两种成分同源重组产生有复制能力的病毒 (RCV ) 的可能性,将包装成分的 5 ′ LTR 换成巨细胞病毒 (CMV ) 立即早期启动子,3 ′ LTR 换成 SV 40 polyA 位点等。将包装成分分别构建在两个质粒上,即一个表达 gag 和 pol、另一个表达 env 。根据这个原理,Naldini 和 Kafri 等构建了三质粒表达系统。

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