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腺相关病毒:腺相关病毒包装过程问题解答(下)
发布日期:2017-05-17 浏览次数 :

  问:重组病毒产品如何运输和保存?

  答:病毒产品一般采取干冰运输。腺病毒及腺相关病毒也可以采用冰袋运输。

  避免重组病毒反复冻融,请酌情分装后于-80℃保存,建议不要在-20℃下长期保存。在我们提供的保存液中,病毒产品-80℃保存期为半年。建议保存6~12个月以上的样品,进行实验前,重新测一次滴度。病毒产品解冻后最好保持在冰浴中,并尽快使用。如果解冻后的病毒一时用不完,滴度足够高时,4℃可保存1~2周。但最好尽快用完,根据我们的经验,4℃放置1周,滴度会有4~5倍的下降。

  问:用于体内试验的重组病毒,是否要求纯化?

  答:是的,病毒纯化是很必要的。因为细胞裂解液包含有缺损颗粒、大量的病毒外壳和penton蛋白(细胞毒素)、培养基、血清以及细胞碎片。这些杂质如果被注入动物体内,会引起宿主强烈的免疫反应。另外,纯化的作用还包括可以将病毒浓缩至一定浓度便于注射、使病毒悬浮于适于体内注射的缓冲液中等。

  问:病毒载体可以浓缩或稀释吗?方法如何?

  答:可以浓缩。对于一般实验室用户,可以采用高速离心办法浓缩。目前市面上的病毒浓缩纯化办法很多,有不少商业化产品。不同的病毒纯化办法不同。腺病毒载体可以用300K以下的浓缩离心管(PALL 公司产品)进行浓缩。一般来说浓缩后的滴度以不超过3×1012v.p/ml为宜,过浓可能导致病毒聚集而产生沉淀。可以稀释:在实验过程中稀释病毒产品的等渗溶液没有其他特殊要求,常规的动物试验用等渗溶液即可,如PBS、生理盐水等。稀释后的样品尽量一次用完。



























        

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