6.收集病毒上清时的离心步骤可以去除细胞碎片以及少数悬浮的293T细胞。必要时，需要过滤以彻底去除一些细胞成分的污染。

　　7.冻融会降低病毒侵染效率50%，因此需要避免多次反复冻融。病毒放置于40C时每36-48小时侵染效率下降50%。

　　8.视实验目的而定，为降低血清成分污染，建议使用低浓度血清培养基。

　　9.通过使用0.45mm的滤膜不仅可以去除细胞碎片残留，还可以去除VSV-G残留片段对细胞的毒性影响，但同时也会部分影响病毒滴度，所以过滤步骤需要依据具体实验目的而定。

　　10.使用TNE重悬病毒沉淀时，虽然低体积会增加病毒浓度，然而由于VSV-G介导病毒与细胞的融合，所以高浓度VSV-G对细胞会造成一定毒性，而有些细胞对VSV-G引起的毒性比较敏感，因此最终体积需要依据具体实验而定。

　　11.超离心纯化病毒步骤可以重复二次，第二次可以使用培养基而不是TNE溶液重悬病毒。

　　12.使用病毒载体侵染细胞时，细胞密度对侵染效率有较大影响。细胞汇合密度过高会降低侵染效率。

　　13.侵染所使用的病毒载体体积和病毒滴度，病毒载体的质量以及靶细胞种类有关。

　　14.使用polybrene之后，需要更换新鲜培养基，因为polybrene对细胞有毒性作用。少数细胞会特别敏感，因此不同细胞polybrene的最佳作用浓度和时间都有所不一样。

　　15.针对悬浮培养细胞的病毒载体侵染，建议使用Spin Infection方法，此法对于侵染效率低的贴壁细胞同样有帮助。

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