为了便于建立rAAV载体细胞株，我们构建了一种通用型AAV载体质粒pSNAV ,该载体在结构上具有以下特点:

　　(1) 含有AAV-2两端的ITR;

　　(2) 两个ITR之间依次为巨细胞病毒(CMV)立早增强子和启动子、多克隆位点和poly A信号。多克隆位点包括KpnⅠ、EcoRⅠ、SalⅠ和Bgl II;

　　(3) ITR外侧具有SV40启动子控制下的新霉素抗性基因表达盒。

　　根据以上特点，研究者只需将目的基因正向插入多克隆位点，即可获得具有完整表达盒的rAAV载体质粒。当该AAV载体插入了外源基因、转染细胞后，利用G418压力选择，可以筛选出携带外源基因的AAV载体细胞株。

　　我们将绿色荧光蛋白(GFP)基因克隆到pSNAV上，构建成rAAV载体质粒pSG1。将pSG1转染BHK-21细胞，经G418选择培养后得到了rAAV-GFP的载体细胞株Cgfp。BHK-21细胞的倍增时间短，细胞易于培养。我们用它来生产rAAV，产量并不低于常用的293细胞、HeLa细胞。采用同样的策略，我们目前已建立了表达多种外源基因的rAAV载体细胞株，这些基因包括大肠杆菌β-半乳糖苷酶(lacZ)基因、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase, CD)基因、胶质细胞源性的神经生长因子(GDNF)基因、血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)基因、人凝血因子IX基因(与复旦大学遗传所合作)等。

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