要获得rAAV的高效生产,首先需确定辅助病毒HSV1rc-/ΔUL2在生产中的用量,即感染复数(multiplicity of infection, MOI)。辅助病毒用量过高,HSV1rc-/ΔUL2本身的复制及表达的基因产物可造成受感染的载体细胞株病变过快,影响rAAV的产量;而辅助病毒用量过低,Rep和Cap的表达就低,同样会影响rAAV的产量。我们的实验表明(吴小兵等, 待发表资料),当HSV1rc-/ΔUL2感染Cgfp的MOI为0.1时,感染后48 h细胞恰好完全病变,得到的rAAV最高,平均每个细胞可产生大约250 TU的rAAV。将细胞在110mm×285mm的转瓶中扩大培养,铺满时一个转瓶的细胞数量可达4×108,最终rAAV的产量可达1011 TU。
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