随后,通过HT-29细胞载体转导实验确认滴度,并使用多重实时PCR技术进行绝对定量分析。同时,以终浓度载体转导原代人CD34+造血干/祖细胞,确认浓缩后载体的转导效力。此外,构建针对诱导多能性干细胞(iPSC)生成的复合STEMCCA载体,以相同的方法进行浓缩,检测其转导和重编程原代人纤维母细胞的能力。
结果
使用TFF进行LV浓缩可获得极高的浓缩系数和回收率,且对浓缩后LV的冻融实验显示,终产物具有良好的稳定性。
为测试浓缩LV的质量,进行了原代人CD34+造血干/祖细胞的转导实验,结果显示,转导非常成功,且随载体浓度的增加,转导成功率亦明显上升,而无明显毒性。而在原代人纤维母细胞转导实验中,含有高效STEMCCA元件的载体可有效转导并重编程原代人纤维母细胞,形成诱导多能性干细胞,且成功率随载体浓度增加而提高。
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