辣么,什么是慢病毒呢?
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞,如原代细胞等,并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中,从而大大增加了转染效率,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。因为是随机整合,也有不确定因素,有些公司还能提供定点整合技术,将靶基因定点整合到基因组特定的部位,从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染。
慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
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