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慢病毒包装与感染之慢病毒的系统
发布日期:2016-12-30 浏览次数 :

  慢病毒包装系统由一个包装质粒混合物(Mix)和一个慢病毒载体质粒(LentiviralVector)组成,以慢病毒载体pLV为例,如下图(图片来自Addgene)

  pLV载体中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他辅助元件WPRE,psi等。

  201226235541774_副本.png

  不同系统包装质粒混合物也不一样,以本实验室的三质粒系统为例,包装质粒混合物中含pMDL,VSVG,pRSV-Rev,比例为5:3:2;其中pMDL含有编码HIV病毒主要结构蛋白的gag基因和编码病毒特异性酶的pol基因,pRSV-Rev含编码调节gag和pol基因表达的调节因子rev基因,VSVG含有提供病毒包装所需要的单纯疱疹病毒来源的VSVG基因。

  以下介绍用293T细胞在六孔板(35mm)中包装病毒,其他孔板相应增加或减少体积。

  准备

  试剂篇

  ☑ 核心质粒;

  ☑ 指数生长的293T细胞;

  ☑ 病毒包装质粒Mix:1 µg/µl(Mix=pMDL: VSV-G : REV=5:3:2),不同载体系统所用的包装病毒质粒也不一样,此系统可用于包装PBOBi,PLKO, Plv等载体质粒。

  ☑ 转染试剂:turbofect, 也可以用其它的如lipo2000等。

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