慢病毒包装系统由一个包装质粒混合物(Mix)和一个慢病毒载体质粒(LentiviralVector)组成,以慢病毒载体pLV为例,如下图(图片来自Addgene)
pLV载体中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他辅助元件WPRE,psi等。
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不同系统包装质粒混合物也不一样,以本实验室的三质粒系统为例,包装质粒混合物中含pMDL,VSVG,pRSV-Rev,比例为5:3:2;其中pMDL含有编码HIV病毒主要结构蛋白的gag基因和编码病毒特异性酶的pol基因,pRSV-Rev含编码调节gag和pol基因表达的调节因子rev基因,VSVG含有提供病毒包装所需要的单纯疱疹病毒来源的VSVG基因。
以下介绍用293T细胞在六孔板(35mm)中包装病毒,其他孔板相应增加或减少体积。
准备
试剂篇
☑ 核心质粒;
☑ 指数生长的293T细胞;
☑ 病毒包装质粒Mix:1 µg/µl(Mix=pMDL: VSV-G : REV=5:3:2),不同载体系统所用的包装病毒质粒也不一样,此系统可用于包装PBOBi,PLKO, Plv等载体质粒。
☑ 转染试剂:turbofect, 也可以用其它的如lipo2000等。
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关 于 维 真 |
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质 粒 现 货 |
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病 毒 现 货 |
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服 务 项 目 |
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技 术 支 持 |
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维真腺相关病毒技术专题 |
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基因突变服务 | |||||||||
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