欢迎来到维真生物科技有限公司官网
您现在的位置:首 页 > 技术支持 >  研究专题
技术支持
请输入基因编号或名称:
产品分类:


Tet-on表达调控系统



1992年Goseen等人成功的利用原核基因调控元件构建了四环素(tetracycline,Tet)真核细胞基因调控表达系统。目前,此系统已被广泛应用于基因功能和基因治疗领域的研究。

 

1、四环素调控表达系统的基本原理

Tet调控表达系统通过诱导药物(如四环素和强力霉素等)改变调控蛋白的构象,从而达到调控目标蛋白表达的目的。

Tet调控基因表达系统是以大肠杆菌Tn10转座子上Tet抗性操纵子为基础而建立的。Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein, TetR)与Tet操纵子(Tet operator, TetO)能够特异性结合。当无诱导药物存在时,TetR会与TetO结合,从而阻断下游耐药基因的表达;当有诱导药物存在时,TetR的构象会发生改变,并从TetO上脱离下来,使下游耐药基因得以表达,细菌从而获得耐药性。


2、Tet-on调控系统

利用TetR和TetO特异性结合的特点,多种类型的Tet调控系统逐渐发展起来。其中,应用较广泛的为Tet-on激活型系统。

Tet-on系统由调节表达载体和反应表达载体组成。调节表达载体包含一个人巨细胞病毒早期启动子(PhCMV)和反义Tet转录活化因子(reverse tetracycline transcriptional activator,rtTA)。其中rtTA由反义TetR(reverse TetR, rTetR)和单纯疱疹病毒(HSV)VP16 蛋白C端的一段转录激活区域融合而成。反应表达载体由Tet应答元件(Tet-responsive element, TRE)、CMV启动子(minimal CMV promoter, PminCMV)及目的基因组成。其中TRE是7个重复的TetO序列。



Tet-on原理:

由于PminCMV缺少增强子,因此rtTA未与TRE结合时,目的基因不表达;当rtTA与TRE结合时,VP16会使PminCMV活化从而使基因表达。在Dox不存在时,rTetR不能与TRE结合,导致基因表达被抑制;而当Dox存在时,rTetR能与TRE结合,进而使得目的基因表达。



Tet-off原理:

rtTA是由rTetR和VP16融合而成的蛋白,它的表型与tTA相反 。当Dox不存在时,rtTA不能结合TRE, 下游基因表达关闭。当存在Dox时,rtTA的构象发生改变,rtTA集合TRE,下游基因表达开启。




3、Tet-on调控系统的优势

 

Tet-on调控系统集高效率、精准、安全、可逆性四大特点。

 


4、维真Tet-on/off服务项目

Tet-on表达调控系统是当前应用更为广泛的四环素调控系统,所以下面小V将以Tet-on为例对维真可做的服务项目进行简单介绍。

维真生物能为客户提供Tet-on表达调控载体,并能根据客户需要包装成teton的腺病毒、慢病毒和腺相关病毒。目前维真使用的是第三代技术(TRE3G)。第三代技术相比于前两代技术来说,背景更低,药物敏感度也更高。

 

病毒类型

表达载体

慢病毒

pLent-TRE3G-hPGK-teton-puro
pLent-TRE3G-CMV-GFP-P2A-puro
pLent-TRE3G-mir30 shRNA

腺病毒

pADM-TRE3G-hPGK-teton
pADM-TRE3G-mCMV-GFP-hPGK-teton

AAV

pAV-TRE3G-hPGK-teton
pAV-TRE3G-P2A-GFP-hPGK-teton
pAV-TRE3G-mir30-shRNA



























        

关 于 维 真

      

质 粒 现 货

      

病 毒 现 货

     

服 务 项 目

      

技 术 支 持  

              

 企业介绍    

 cDNA克隆现货

 神经递质探针   

 表达载体系统 

 研究专题

 

 

   维真腺相关病毒技术专题

 

 荣誉资质      

                 

 人源miRNA克隆  

               

 病毒筛选试剂盒

             

 质粒克隆服务 

              

 客户文章

 

 

 使命和前景  

 

 shRNA文库 

 预制ORF腺病毒

 腺病毒包装服务  

 产品手册   

 

  

 企业文化  

 shRNA现货克隆

 AAV现货  

 慢病毒包装服务

 常见问题解答

 

 加入我们  

 维真生物试剂产品

 预制miRNA腺病毒

  AAV包装服务

 资料下载

 

  


   



  双标自噬病毒产品

 订单进度查询

 

   

 


 

  shRNA克隆服务

 

 

  

        点击进入新网站

 

  

 

  基因突变服务        



关键词:

腺病毒 | 慢病毒 | 腺相关病毒 | 腺病毒现货 | 腺病毒包装 | 慢病毒包装 | 腺相关病毒包装 | 载体构建 | 质粒 | 细胞自噬 | shRNA | sgRNA | AAV包装 | 维真生物
腺病毒载体|慢病毒载体|AAV包装|病毒包装|miRNA|LC3双标病毒|慢病毒转染|慢病毒表达载体|慢病毒感染|慢病毒载体构建|慢病毒滴度测定|慢病包装服务|腺病毒感染|腺病毒感染细胞|腺病毒转染|腺病毒浓缩|腺病毒载体构建|腺病毒载体构建方法|腺病毒滴度|腺相关病毒载体|重组腺相关病毒|腺相关病毒AAV|质粒载体|质粒载体构建|质粒购买|提取质粒|质粒订购|载体构建|表达载体| shRNA |AAV|光遗传|自噬|细胞自噬|慢病毒系统|病毒包装步骤|病毒包装|腺病毒干扰|腺病毒滴度|sirna|表达载体|基因克隆|质粒提取|基因编辑|cdna文库|CRISPR/cas9|cas9|CRISPR|干扰rna|腺病毒包装原理|crispr-cas9

备案号:鲁ICP备13011878号
售前客服
客服接待时间8:30-17:00

微信公众账号