Tet-on表达调控系统

1992年Goseen等人成功的利用原核基因调控元件构建了四环素（tetracycline,Tet）真核细胞基因调控表达系统。目前，此系统已被广泛应用于基因功能和基因治疗领域的研究。

Tet调控表达系统通过诱导药物（如四环素和强力霉素等）改变调控蛋白的构象，从而达到调控目标蛋白表达的目的。

Tet调控基因表达系统是以大肠杆菌Tn10转座子上Tet抗性操纵子为基础而建立的。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）与Tet操纵子（Tet operator, TetO）能够特异性结合。当无诱导药物存在时，TetR会与TetO结合，从而阻断下游耐药基因的表达；当有诱导药物存在时，TetR的构象会发生改变，并从TetO上脱离下来，使下游耐药基因得以表达，细菌从而获得耐药性。

利用TetR和TetO特异性结合的特点，多种类型的Tet调控系统逐渐发展起来。其中，应用较广泛的为Tet-on激活型系统。

Tet-on系统由调节表达载体和反应表达载体组成。调节表达载体包含一个人巨细胞病毒早期启动子（PhCMV）和反义Tet转录活化因子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其中rtTA由反义TetR（reverse TetR, rTetR）和单纯疱疹病毒（HSV）VP16 蛋白C端的一段转录激活区域融合而成。反应表达载体由Tet应答元件（Tet-responsive element, TRE）、CMV启动子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目的基因组成。其中TRE是7个重复的TetO序列。

Tet-on原理:

由于PminCMV缺少增强子，因此rtTA未与TRE结合时，目的基因不表达；当rtTA与TRE结合时，VP16会使PminCMV活化从而使基因表达。在Dox不存在时，rTetR不能与TRE结合，导致基因表达被抑制；而当Dox存在时，rTetR能与TRE结合，进而使得目的基因表达。

Tet-off原理:

rtTA是由rTetR和VP16融合而成的蛋白，它的表型与tTA相反 。当Dox不存在时，rtTA不能结合TRE, 下游基因表达关闭。当存在Dox时，rtTA的构象发生改变，rtTA集合TRE，下游基因表达开启。

Tet-on调控系统集高效率、精准、安全、可逆性四大特点。

Tet-on表达调控系统是当前应用更为广泛的四环素调控系统，所以下面小V将以Tet-on为例对维真可做的服务项目进行简单介绍。

维真生物能为客户提供Tet-on表达调控载体，并能根据客户需要包装成teton的腺病毒、慢病毒和腺相关病毒。目前维真使用的是第三代技术（TRE3G）。第三代技术相比于前两代技术来说，背景更低，药物敏感度也更高。