慢病毒包装:细胞分盘
通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基平铺细胞于35mm 培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占面积达到培养皿总面积的80%以上)。将细胞置于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前 2h 换液(用1.5ml 完全培养基置换旧的培养基)。
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慢病毒包装:混匀核心质粒和包装质粒
取无菌1.5ml EP管,加入400µl 无血清DMEM,加入1.5µg 核心质粒和1.5µg 病毒包装质粒,及6µl turbofect (turbofect :质粒=2:1),充分混匀,静置15-20min。
慢病毒包装:孵育
将这400μl 的混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀后置于含5%CO2的37℃温箱孵育。
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