进行重组AAV注射时,精确靶向侧脑室可使得脑损伤降到最小。选取出生后6小时的P0小鼠,精确定位两个侧脑室注射点——一个插入点是位于λ与眼睛之间的假想线的2 / 5处(近λ);另一个点是位于λ和前囱点连线的中点,距离矢状缝1mm处(Fig 1A & 1B)。将注射针垂直插入头骨表面深3mm处,把总体积为2μL的重组AAV、PBS和0.05%的台盼蓝染液推入。
准确注射后,应观察到从嗅球到小脑之间连贯整个大脑脑室的染色。在喙纹状体部位的大脑横切面应显示染料填充整个脑室且限制在脑室内(Fig 1D)。值得注意的是,选择合适大小的针头既能够避免组织损伤,又能防止针头堵塞。利用此AAV侧脑室注射法可得到大于95%的小鼠生存率和较为一致的感染模型,且不会出现组织损伤。
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