一、性能参数
产品名称：VigeneFection 简称“VGF” 产品货号： FH880806
浓度：1μg/μl 推荐使用浓度：1μg-10μg/ml
规格：50μl （赠送） 保存条件：2-8℃ ，切勿放-20℃
有效期至： 18个月 运输条件：常温运输
使用范围：仅限科研使用，不能应用于临床。
二、产品详细描述
1、产品说明
VGF（质粒转染试剂）是一种多聚阳离子聚合物，具有较高的阳离子电荷密度使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，经进一步的改性后，其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。
2、主要特点
· 高效转染各种贴壁细胞。
· 对悬浮细胞有很高的转染效率。
· 在同类产品中具有较高的转染效率和较低的毒性。
· 有无血清存在(0-20％)对转染试剂的效果无影响。
· 可用于单个质粒或多个质粒共转。
· 转染24-72小时后，有高的蛋白表达量。
3、注意事项
推荐在混合前使用Opti-MEM （Cat. No. 267485)或DMEM细胞培养基(Cat. No. SH30022.01B)稀释VigeneFection 和核酸。
· 转染过程中勿向培养基中添加抗生素，以免造成细胞死亡。
· 不同批次实验请保持细胞接种条件相同。
· 转染前细胞的状态好坏对最终的转染效果高低影响很大，请务必保证转染前，细胞处于良好的生长状态。
三、质粒转染步骤
所列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，其他培养材料，请参考表1按照转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与VigeneFection(μg)的比值为1:3或1:4，转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。
1、贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中，在转染时细胞可长至90-95%融合。
悬浮细胞：在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中。
2、转染液制备，每孔细胞用量如下：
A. 用50μlDMEM培养基（或者其他无血清培养基）稀释质粒DNA，轻轻混匀。
B. 取适量VigeneFection 在50μl DMEM培养基中稀释，室温孵育5min。
C. 将前两步所稀释的DNA和VigeneFection 混合，轻轻混匀，室温放置30min。
3、在每孔细胞中加入混合后的转染液，轻轻摇匀。
4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基，悬浮细胞可在转染后的18-48h之间，对细胞进行换液。转染18-48h之后可检测基因表达。如果检测到蛋白表达，请在转染后24-72h收集培养液。
5、对于稳定转染，在转染24h后以1:10传代培养，第二天可加入选择培养基。
表1 各种细胞培养板转染推荐用量
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培养皿/板
|
表面积(cm2)
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种板密度
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培养液
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混合液
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质粒
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VGF
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10cm
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60
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2-3×106cell/dish
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10 ml
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2×500μl
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10μg
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30-40 μl
|
|
60mm
|
20
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8-10×105cell/dish
|
3 ml
|
2×150μl
|
3μg
|
9-12 μl
|
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6孔
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10
|
2-3×105cell/well
|
2 ml
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2×100μl
|
2.5μg
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7.5-10 μl
|
|
12孔
|
4
|
1-3×105cell/well
|
1 ml
|
2×50μl
|
1μg
|
3-4 μl
|
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24孔
|
2
|
0.5-2×105cell/well
|
0.5 ml
|
2×25μl
|
0.5μg
|
1.5-2 μl
|
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96孔
|
0.3
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1000-100000cell/well
|
0.1 ml
|
2×5μl
|
0.1μg
|
0.3-0.4 μl
|
下图为我司VGF试剂与其他转染试剂在不同细胞中的对比图
左图为我司VGF转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HEK293细胞时的对比实验，实验结果表明，我司VGF的转染效率要明显超过品牌试剂转染效率；
右图为我司VGF转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HepG2细胞时的对比实验，实验结果表明，我司VGF的转染效率要明显超过品牌试剂的转染效率。
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