AAV感染肺部有多种方法,较为常用的方法为鼻内滴注、气管插管、气管内注射等。本文先介绍鼻内滴注法,其他两种后续更新推出。
一、鼻内滴注法简介
鼻内滴注法是一种直接的AAV感染法,操作简单且对设备要求低,对新手实验员也同样适用。缺点是AAV颗粒容易沉积在上呼吸道(鼻道、鼻窦和咽)和胃肠道,如果需要有效地感染到下呼吸道,则可能需要更大剂量的AAV才能实现。
鼻内滴注法
优点
比较直接;操作简单;对设备要求低;新手可做;
缺点
AAV颗粒容易沉积在上呼吸道和胃肠道,若需有效感染下呼吸道,则可能需要更大剂量的AAV;
二、鼻内滴注法操作步骤
第1步: 腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉;
注意:动物必须处于足够深的麻醉状态以防止运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽)
第2步: 将小鼠以背卧姿势固定在啮齿动物工作台上;
第3步: 将门牙环置于小鼠上门牙上,并将尼龙搭扣连接到啮齿动物工作台下表面的相应尼龙搭扣上;
第4步: 慢慢地将AAV悬液通过小鼠鼻孔内壁逐滴滴入,为保证最大的肺部感染效率,最小体积为50μL(每个鼻孔25μL),最大体积为75μL(每个鼻孔37.5μL)。待小鼠呼吸恢复正常后,再滴入一次75μL的AAV悬液;
第5步: 将小鼠轻轻从工作台拿下,并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高,以保证小鼠顺畅的呼吸;
第6步: 小鼠苏醒后,放回鼠笼。
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