研究背景

研究表明，雄激素受体AR不仅能在前列腺癌中发挥重要作用，更能促进乳腺癌的发生发展。通过前期研究作者发现，USP14可以通过其去泛素化酶的活性稳定雄激素受体，促进前列腺癌的生长。本篇文章则主要探究去泛素化酶USP14对雄激素受体阳性乳腺癌发生发展的影响。目前该论文已经发表在《Oncogene》上（IF:6.854）。（本篇文章所用慢病毒产品由维真生物提供）

路线设计

研究者通过siRNA和shRNA等工具，敲低USP14的表达，然后检测雄激素受体AR的表达，泛素化水平和降解速率，判定USP14是雄激素受体AR的去泛素化酶。稳定AR的水平，并进一步通过AR的补救实验判定USP14敲低或者抑制引起的乳腺癌细胞的生长抑制是依赖于AR的水平。

病毒产品及使用

研究者通过USP14干扰慢病毒感染多种乳腺癌细胞（MDA-MB453、MDA-MB 231、MCF7、MDA-MB 468、HCC1937、T47D），48h后，利用嘌呤霉素进行筛选，构建稳定表达的USP14 shRNA的乳腺癌细胞株。研究者通过检测GFP的表达来检测干扰慢病毒的感染与筛选效率，通过检测USP14的表达，检测病毒的感染效率。结果如图1所示，USP14干扰慢病毒有着极高的感染效率与基因敲除效率。并且，USP14能调控AR的表达，抑制USP14基因的表达后，雄激素受体AR的表达显著降低。

为证明USP14是AR的泛素化酶，研究者通过利用co-IP的实验技术，检测乳腺癌细胞MDA-MB-453中USP14、AR及两种泛素酶的表达。结果如图2所示，研究者发现在敲除USP14基因后，AR泛素化酶的水平显著增加，这说明，USP14的确是AR的去泛素化酶，通过去泛素化途径调节细胞内AR的水平；

接着研究者又通过Western Blot与免疫荧光技术，探究USP14对于AR转移的影响。结果如图3所示，在雄激素条件下，与对照组相比，干扰USP14的表达后，核内外的AR表达均下调（橙色为核外，蓝色为核内），这说明，USP14确是调控了AR的表达而非AR的转移。