一、实验准备：

① 载体：Lenti-Crispr-2in1 gRNA
② 敲除基因：human AKT1
③ 细胞系：HEK293细胞
④ 序列：

二、实验流程：

1.分别构建AKT1基因4条单独sgRNA载体，及两对2in1 sgRNA载体；

2.将4条sgRNA分别转染293细胞以及两对2in1 sgRNA载体共转染293细胞；

3.抗性筛选后，收集细胞；

4.基因组PCR验证sgRNA编辑效率。

三、敲除效果分析：

1. 基因敲除效果分析

小结：经测序及ICE软件分析，可见，多条sgRNA的编辑效果优于单条sgRNA编辑效果。

2.  ICE软件分析编辑效率

小结：经测序及ICE软件分析，可见，多条sgRNA的编辑效果优于单条sgRNA编辑效果。

四、慢病毒

慢病毒 IU（Integration Unit）ml-1

IU ml-1=(C×N×D×1000)/V

C=平均每基因组慢病毒整合拷贝数

N=感染时细胞的数目（约为2.5×10E5）

D=病毒的稀释倍数

V=加入稀释病毒的体积数

小结：经qPCR滴度检测，Lenti-Crispr-2in1 sgRNA慢病毒滴度可达1.0X10E8 IU/mL以上；

五、维真敲除新品及优势

维真生物现已隆重推出基因敲除新产品，Lenti-Crispr-2in1 sgRNA慢病毒：

第一，保证敲除效率：保证gRNA工作，极大程度上提高敲除效率；

第二，慢病毒滴度高：维真为您提供高滴度的慢病毒，满足体内外实验的需求；

第三，选择性更多：维真可将2对2in1 gRNA分别包装成慢病毒，还可将2对2in1 gRNA包装成一个慢病毒；

科学实验探索，敲除效率更有保证！